ELISA的基本过程是

1、 包被过程(注意设置空白对照，阴性对照):

将所用抗原用包被稀释液稀释到适当浓度(一般所需抗原包被量为每孔20-200μg)，每孔抗原加入100μl， 置37℃，4h，或4℃，24h弃去孔中液体.(为避免蒸发，板上应加盖或将板平放在底部有湿纱布的金属湿盒中)

2、 封闭酶标反应孔:

5%小牛血清置37℃封闭40min.封闭时将封闭液加满各反应孔，并去除各孔中的气泡，封闭结束后用洗涤液满孔洗涤3遍，每遍3min.

洗涤方法:吸干孔内反应液，将洗涤液注满板孔，放置2min略作摇动，吸干孔内液，倾去液体后在吸水纸上拍干。洗涤次数3次

3、 加入待检测样品(建立合适的浓度梯度):

检测时一般采用1:50-1:400的稀释度， 应采用较大稀释体积进行，一般保证样品吸取量>20μl.

将稀释好的样品加入酶标反应孔中，每样品至少加双孔， 每孔100μl，置于37℃，40-60min.用洗涤液满孔洗涤3遍，每遍3min.

4、 加入酶标抗体:

酶标抗体: 根据酶结合物提供商提供的参考工作稀释度进行. 37℃，30-60min之间.短于30min往往结果不稳定.每孔加100μl.洗涤同前。

5、 加入底物液(现用现配):

首选TMB-过氧化氢尿素溶液，OPD-过氧化氢底物液系统次之.

底物加入量:每孔100μl，置37℃避光放置3-5分钟，加入终止液显色.

6、 终止反应:

每孔加入终止液50μl终止反应，于20min内测定实验结果